Analyse fonctionnelle des protéines participant à l’assemblage des centres fer-soufre dans le chloroplaste
UMR IaM Interactions Arbres Microorganismes, Equipe réponse aux stress et régulation redox.
Le fer est essentiel pour la nutrition des plantes mais il peut également être toxique à travers la formation d’espèces oxygénées réactives pouvant conduire à un stress oxydant. Ce métal est prépondérant pour de nombreux processus physiologiques (photosynthèse, respiration, assimilation du soufre et de l’azote) étant présent dans de nombreuses métalloprotéines, comme celles contenant des centres fer-soufre (Fe-S) et des hèmes. L’assemblage des centres Fe-S requiert des machineries spécifiques, toutefois le rôle exact des différentes protéines impliquées est encore peu caractérisé, en particulier chez les plantes.
L’objectif est de développer une analyse fonctionnelle de protéines candidates participant à la machinerie d’assemblage chloroplastique, appelée SUF (pour sulfur mobilisation). Nous souhaitons ainsi produire les protéines recombinantes correspondantes dans la bactérie Escherichia coli et les purifier afin de déterminer le type de centres fer-soufre qu’elles sont capables d’incorporer. Dans un second temps, leur capacité à interagir deux à deux sera testée à l’aide d’approches biochimiques et d’expériences de transfert in vitro de centres fer-soufre. Les interactions seront également vérifiées in vivo par des approches de double hybride en levure et in planta par des approches de co-immunoprécipitation et de co-localisation par fluorescence. Le développement de senseur fluorescent permettant de suivre in vivo et de manière dynamique l’assemblage de centres fer-soufre dans une protéine donnée sera également envisagé.
Contact : Pr Nicolas Rouhier, Membre junior de l’Institut Universitaire de France.
Mail : Nicolas.Rouhier@univ-lorraine.fr ; Tel : 03 83 68 42 25
Production scientifique récente majeure en lien avec le sujet:
1. Mapolelo DT, Zhang B, Randeniya S, Albetel AN, Li H, Outten CE, Couturier J, Rouhier N, Johnson MK. Monothiol glutaredoxins and A-type proteins: Partners in Fe-S cluster trafficking. Dalt trans. 2013, 42:3107-15.
2. Couturier J, Stroher E, Albetel AN, Roret T, Muthuramalingam M, Tarrago L, Seidel T, Tsan P, Jacquot JP, Johnson MK, Dietz KJ, Didierjean C, Rouhier N. Arabidopsis chloroplastic glutaredoxin C5 as a model to explore the molecular determinants for iron-sulfur cluster binding into glutaredoxins. J Biol Chem. 2011, 286:27515-27.
3. Bandyopadhyay S, Gama F, Molina-Navarro MM, Gualberto JM, Claxton R, Naik SG, Huynh BH, Herrero E, Jacquot JP, Johnson MK, Rouhier N. Chloroplast monothiol glutaredoxins as scaffold proteins for the assembly and delivery of [2Fe-2S] clusters. EMBO J. 2008, 27:1122-33.
4. Rouhier N, Hideaki Unno H, BandyopadhyayS, Masip L,Kim SK, Hirasawa M, Gualberto JM, Lattard V, Kusunoki M, Knaff DB, Georgiou G, Hase T, Johnson MK, Jacquot JP. Functional, structural and spectroscopic characterization of a glutathione-ligated [2Fe-2S] cluster in poplar glutaredoxin C1. Proc Natl Acad Sci USA 2007, 104(18):7379-84.
Autres indices de production scientifique :
99 articles dans des revues à comité de lecture international
Facteur h : 31
Nombre total de citations : 3065
Nombre moyen de citations par article : 31
